Licenciada en Derecho por la Universidad Complutense de Madrid, ingresó por oposición, primero, en la Carrera Judicial y, después en la Carrera Fiscal. 

Tras ejercer como fiscal en la Fiscalía de la Audiencia Provincial de Guipúzcoa, su segundo destino fue la Fiscalía de la Audiencia Nacional, donde permaneció durante más de 17 años. En 1999, fue nombrada fiscal del Tribunal Supremo, puesto que ocupó hasta 2007. Ese año solicitó la excedencia voluntaria para dedicarse a la abogacía. María Dolores Márquez de Prado es especialista en procedimientos civiles por vulneración del honor, así como en la defensa penal de casos de injurias y calumnias, ofreciendo asesoramiento y representación experta en ambos ámbitos, siendo reconocida en prestigiosos rankings legales.

Autora de varias publicaciones sobre Derecho Penal sustantivo y procesal, interviene con frecuencia en cursos y conferencias de carácter jurídico.